Fluoreszentzia-mikroskopiak ale biologikoak ikusteko eta aztertzeko dugun gaitasuna irauli du, zelulen eta molekulen mundu korapilatsuan murgiltzeko aukera emanez. Fluoreszentzia-mikroskopiaren funtsezko osagaia laginaren barruan molekula fluoreszenteak kitzikatzeko erabiltzen den argi iturria da. Urteetan zehar, hainbat argi-iturri erabili dira, bakoitzak bere ezaugarri eta abantaila bereziekin.
1. Merkurio Lanpara
Merkuriozko presio handiko lanpara, 50 eta 200 watt bitartekoa, kuartzozko beira erabiliz eraikita dago eta forma esferikoa du. Barruan merkurio kopuru jakin bat dauka. Funtzionatzen denean, deskarga bat gertatzen da bi elektrodoren artean, merkurioa lurrunduz, eta esferaren barne-presioa azkar handitzen da. Prozesu honek normalean 5 eta 15 minutu inguru irauten du.
Merkuriozko presio handiko lanpararen igorpena elektrodoaren deskargan merkurio molekulak desegiten eta murrizten dira, eta argi-fotoiak igortzen dira.
Argi ultramore eta urdin-more indartsuak igortzen ditu, hainbat material fluoreszente kitzikatzeko egokia da, horregatik oso erabilia da fluoreszentzia mikroskopian.
2. Xenon lanparak
Fluoreszentzia mikroskopian erabili ohi den beste argi zuri-iturri bat xenon lanpara da. Xenozko lanparek, merkuriozko lanparak bezala, uhin-luzera espektro zabala eskaintzen dute ultramoretik infragorri hurbilera. Hala ere, haien kitzikapen-espektroetan desberdinak dira.
Merkuriozko lanparek ia ultramore, urdin eta berde eremuetan kontzentratzen dute igorpena, eta horrek seinale fluoreszente distiratsuak sortzea bermatzen du, baina fototoxikotasun handia du. Ondorioz, HBO lanparak normalean lagin finkoetarako edo fluoreszentzia ahuleko irudietarako gordetzen dira. Aitzitik, xenozko lanpara iturriek kitzikapen-profil leunagoa dute, uhin-luzera desberdinetan intentsitatea konparatzeko aukera emanez. Ezaugarri hau abantailatsua da kaltzio ioien kontzentrazioen neurketa bezalako aplikazioetarako. Xenon lanparek ere kitzikapen handia erakusten dute infragorri hurbilean, batez ere 800-1000 nm inguruan.
XBO lanparak abantaila hauek dituzte HBO lanparek baino:
① Intentsitate espektral uniformeagoa
② Intentsitate espektral indartsuagoa infragorri eta infragorri erdiko eskualdeetan
③ Energia irteera handiagoa, helburuaren irekiera errazago iristea erraztuz.
3. LEDak
Azken urteotan, lehiakide berri bat sortu da fluoreszentziazko mikroskopioko argi iturrien arloan: LEDak. LED-ek milisegundotan pizteko eta itzaltzeko azkarren abantaila eskaintzen dute, laginaren esposizio-denborak murrizten eta lagin delikatuen bizi-iraupena luzatzen dute. Gainera, LED argiak desintegrazio azkarra eta zehatza erakusten du, epe luzerako zelula bizien esperimentuetan fototoxikotasuna nabarmen gutxituz.
Argi zuri-iturriekin alderatuta, LEDak normalean kitzikapen-espektro estuago baten barruan igortzen dira. Hala ere, LED banda anitz daude eskuragarri, kolore anitzeko fluoreszentzia aplikazio polifazetikoak ahalbidetuz, eta LEDak gero eta aukera gehiago dira fluoreszentzia mikroskopia modernoen konfigurazioetan.
4. Laserrak Argi iturria
Laser argi-iturriak oso monokromatikoak eta norabideak dira, eta bereizmen handiko mikroskopiorako aproposa da, STED (Stimulated Emission Depletion) eta PALM (Photoactivated Localization Microscopy) bezalako bereizmen handiko teknikak barne. Laser argia normalean xede-fluorofororako beharrezkoa den kitzikapen-uhin-luzera espezifikoarekin bat etor dadin hautatzen da, fluoreszentzia-kitzikapenean selektibitate eta zehaztasun handia eskainiz.
Fluoreszentzia-mikroskopioaren argi-iturri baten aukeraketa baldintza esperimental zehatzen eta laginaren ezaugarrien araberakoa da. Mesedez, jar zaitez gurekin harremanetan laguntzarik behar baduzu
Argitalpenaren ordua: 2023-09-13