Fluoreszentzia mikroskopioa mikroskopio optiko mota bat da, intentsitate handiko argi-iturri bat erabiltzen duena laginak argitzeko eta laginaren fluorokromoak kitzikatzeko. Alearen argiztapena argi ultramorea igortzen duen argi iturri batekin egin ohi da. Biologia, medikuntza eta industria arloetan asko erabiltzen dira.
Nola funtzionatzen du fluoreszentzia mikroskopio batek?
Fluoreszentzia-mikroskopio batek merkurio edo xenoi lanpara bat erabiltzen du argi ultramorea sortzeko. Argia mikroskopiora sartzen da eta ispilu dikroiko bat jotzen du, uhin-luzera-tarte bat islatzen duen eta beste tarte bat igarotzen uzten duen ispilu bat. Ispilu dikroikoak argi ultramorea islatzen du aleraino. Ale batzuek argi ultramorearen azpian fluoreszente egiten dute modu naturalean, klorofila bezalako substantzia fluoreszenteak dituztelako. Ikusi beharreko aleak berez fluoreszen ez badu, fluorokromo izeneko koloratzaile fluoreszenteekin tinda daiteke.
Zertan datza fluoreszentzia mikroskopioa?
1. Argi iturria
Argi iturri ohikoenak merkurioa, xenoia eta LEDak dira. Merkuriok argiaren kalitate onena eskaintzen du fluoreszentzia mikroskopiorako. LEDak gero eta ezagunagoak dira, beste iturri batzuk baino garestiagoak direlako eta energia gutxiago kontsumitzen dutelako.
| Merkurio Lanpara | Xenon lanpara | LED | |
| Igorritako Argiaren uhin-luzera | 350-370 nm | 400nm ~ 450nm | 400-700 nm |
| Bizitza (ordua) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| Abantaila | 1. Intentsitate handiko argia, argi-iturri ohikoenak. 2. Ultramore eta urdin-more indartsuak igortzen ditu era guztietako fluoroforoak kitzikatzeko. 3. Irudi distiratsuak eta koloretsuak. | 1. Intentsitate espektrala egonkorra da. 2. Infragorrian eta infragorri erdian intentsitate espektral handia. | 1. Erraza ordezkatzeko. 2. Ez da berotu beharrik. 3. Berehala piztu eta itzal daiteke. 4. Kontrolatu argi iturriaren intentsitatea. |
| Desabantaila | 1. Bizitza laburra. 2. Beroketa denbora luzea. | 1. Tentsio baxuko DC potentzia kutxa berezia behar da gehiegizko beroa lortzeko. 2. Merkurioko lanpara baino garestiagoa | 1. UV argia merkuriozko lanpara baino ahulagoa da. 2.Argiaren uhin-luzera bakoitzak LED bereizi bat behar du igortzen duten banda-zabalera estuagatik. |
Merkurio Fluoreszentea Eranskina
LED fluoreszentea eranskina
2. Zirrara-iragazkia
Kitzikapen-iragazkia ezinbestekoa da fluoreszentzia-mikroskopio baten funtzionamendurako. Uhin-luzera laburrago bateko argia pasatzen du, kolore fluoreszenteak xurga dezakeena. Gainera, argi zirraragarriaren beste iturriak blokeatzen ditu.
Kitzikapen iragazkia (B,G,U,V)
3. Ispilu dikroikoa
Ispilu dikroikoa iragazki optiko mota bat da, argia uhin-luzera jakin batzuetan islatzen duena, beste batzuk transmititzen dituen bitartean. Fluoreszentzia mikroskopioetan erabiltzen da kitzikapen eta igorpen uhin-luzerak bereizteko.
4. Igorpen-iragazkia
Igorpen-iragazkiak fluoroforoak igorritako uhin-luzerak baino ez ditu pasatzen eta banda honetatik kanpo nahi ez den argi guztia blokeatzen du, batez ere kitzikapen-uhin-luzerak.
5. Tindagai fluoreszenteak
Tindagai fluoreszenteak fluoreszentziaren propietate bat duten konposatu organikoak dira, eta horren bidez irudi fluoreszente bat sor dezakete kontraste handiko argi berde ikusgaia igorriz argi ultramore argitsuak kitzikatu ondoren. Normalean erabiltzen diren koloratzaile fluoreszenteak hauek dira; DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole), akridina laranja, auramina-rodamina, Alexa Fluors edo DyLight 488.
Zenbat fluoreszentzia mikroskopio mota?
1. Epifluoreszentzia Mikroskopioa:
Fluoreszentzia mikroskopio mota ohikoena da. Fluoroforoaren kitzikapena eta fluoreszentziaren detekzioa argi bide beretik egiten dira (objektiboaren bidez, alegia). Fluoreszentzia-mikroskopio gehienak, batez ere bizitza zientzietan erabiltzen direnak, epifluoreszentzia diseinukoak dira.
BS-2081F Ikerketa Mikroskopio Biologiko Fluoreszentea
2. Fluoreszentzia Mikroskopio Konfokala:
Fluoreszentzia-mikroskopio konfokala: fluoreszentzia-mikroskopio mota honek laser bidezko eskaneatzea argiztapen fluoreszentearekin konbinatzen du irudi bat sortzeko. Aplikazio ugaritan erabil daiteke, hala nola, zelulak eta ehunak aztertzen, zelulen barruan proteinak eta beste substantzia batzuk detektatzeko eta materialen lodiera neurtzeko.
BS-2081F Ikerketa Mikroskopio Biologiko Fluoreszentea
3. Alderantzizko Fluoreszentzia Mikroskopioa
Mikroskopio mota honen argi iturria eta kondentsadorea goiko aldean daude, behera begira. Argiztapen-angeluak 90 gradukoa izan behar du aztertzen ari den laginaren gainazalaren aldean.
BS-2095F Alderantzizko Mikroskopio Fluoreszentea
Zeintzuk dira fluoreszentzia-mikroskopioen abantailak eta desabantailak?
Abantailak:
- Izaki bizidunetako zelulak kaltetu gabe behatzeko aukera ematen du
- Bereizmen handiko irudiak ematen ditu kolore zehatzekin
- Zeluletan bizi diren prozesuak aztertzeko aukera ematen du
- Zelulen barruan hainbat molekula identifikatzeko erabili, hala nola proteinak edo azido nukleikoak.
Desabantailak:
-Tingagai fluoreszentearekin markatutako zelula baten barruan egitura zehatzak behatzea baino ez du ahalbidetzen.
-Fluoreszentzia-prozesuan zehar elektroien kitzikapenaren ondoriozko fotoziztaketak koloratzaile fluoreszenteen molekula erreaktiboei eragin diezaieke. Ondorioz, koloratzaile erreaktiboek fluoreszentzia-igorpen-intentsitatearen propietate kimikoa gal dezakete.
-Zelulak efektu fototoxikoa jasaten dute koloratzaile fluoreszenteekin tindatu ondoren, fluoroforo molekulek uhin-luzera laburreko argiaren energia handiko fotoiak xurgatzen baitituzte.
Zeintzuk dira fluoreszentzia-mikroskopioaren aplikazioak?
Fluoreszentzia-mikroskopioak asko erabiltzen dira hainbat ikerketa eta aplikazio eremutan, besteak beste, biokimika, biologia zelularra, mikrobiologia, immunologia eta medikuntza.
1. Biologiaren arloan, fluoreszentzia-mikroskopioak osagai zelular eta azpimikroskopikoen identifikazio zehatza eta zehatza ahalbidetzen du koloratzaile fluoreszenteen etiketatzearen laguntzaz.
2. Medikuntza arloan, fluoreszentzia-mikroskopioak erreaktibo fluoreszenteak erabil ditzake bakterio eta birusen presentzia eta banaketa detektatzeko, edo kirurgia errazteko helburu kirurgikoak etiketatzen laguntzeko.
3. Mineralogia arloan, fluoreszentzia-mikroskopioa sarritan erabiltzen da fluoreszentzia berezko propietateak dituzten substantziak aztertzeko, hala nola asfaltoa, petrolioa, ikatza, grafeno oxidoa eta beste mineral batzuk.
4. Materialen zientzian, fluoreszentzia-mikroskopioa ehungintzan edo paperaren industrian erabil daiteke zuntzetan oinarritutako materialak aztertzeko.
Argitalpenaren ordua: 2023-03-14